ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒
1.1 內(nèi)毒素介紹
內(nèi)毒素脂多糖分子(LPS) 是革蘭氏陰性細(xì)菌細(xì)胞壁的主要成分，由菌體特異性多糖、非特異性核心多糖和脂質(zhì) A 三部分構(gòu)成。內(nèi)毒素對(duì)哺乳動(dòng)物有很顯著的致熱性，少量的內(nèi)毒素靜脈注射就可以引起發(fā)燒，大劑量時(shí)可以引起感染性休克、敗血癥、多器官功能性衰竭等。生物制藥中抗體藥作為一類靶向藥物由于用量較大，對(duì)內(nèi)毒素限度的要求更高，由于抗體藥生產(chǎn)和純化工藝都十分復(fù)雜，有諸多環(huán)節(jié)可能將內(nèi)毒素帶入其中，因此簡(jiǎn)單且快速的去除內(nèi)毒素可以為產(chǎn)品的研發(fā)、生產(chǎn)提供有利保障。

1.2 試劑盒組分
ENDOCLING® 是一款高效內(nèi)毒素去除試劑盒，它以內(nèi)毒素結(jié)合蛋白作為配體通過(guò)化學(xué)鍵固定在聚合物磁性微球上，由于其帶有磁性，進(jìn)行特異性的內(nèi)毒素清除后很容易進(jìn)行分離和去除，經(jīng)ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒純化的樣品最終內(nèi)毒素低于 2EU/ml。

表1： ENDOCLING®內(nèi)毒素去除磁珠的主要特性

項(xiàng)目	性能
基質(zhì)	聚合物磁性微球
配體	內(nèi)毒素結(jié)合蛋白
結(jié)合能力	1ml去除20000-25000EU的內(nèi)毒素
磁珠濃度	10mg/ml
適用樣品	抗原、多肽、抗體、細(xì)胞因子、質(zhì)粒、AAV和慢病毒等
儲(chǔ)存溫度	2-8℃
儲(chǔ)存緩沖液	0.01M PBS(pH=7.4)

1.3 保存與運(yùn)輸運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸，不可凍結(jié)。保存：2-8 ℃冷藏保存，不可凍結(jié)。

2. 產(chǎn)品特點(diǎn)

1)ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒更適用于內(nèi)毒素含量不超過(guò) 4000EU/ml 的樣品，隨著內(nèi)毒素含量的增加去除效果會(huì)下降，不建議使用本產(chǎn)品去除內(nèi)毒素含量超過(guò) 10000EU/ml 的樣品，在含有 2500EU/ml、250EU/ml、25EU/ml、2.5EU/ml 脂多糖 (Escherichia coli O55:B5) 的樣品中，可以一次性將內(nèi)毒素去除至 2EU/ml 以下；
2)ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒操作步驟簡(jiǎn)單，只需要將 ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除磁珠清洗后加入樣品中搖晃孵育 60min，通過(guò)磁力架富集磁珠就可以去除樣品中的內(nèi)毒素；
3)ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒不會(huì)影響樣品性狀如質(zhì)粒的超螺旋、抗體的純度，且能夠在溫和的條件下特異性吸附內(nèi)毒素，產(chǎn)品回收率≥95%；
4) 產(chǎn)品使用方便，ENDOCLING® 內(nèi)毒素去除試劑盒中提供無(wú)熱源清洗緩沖液、移液槍頭、磁力架（可選）等。

3. 使用方法

3.1 計(jì)算磁珠使用量磁珠使用量需要考慮兩個(gè)因素：首先需要根據(jù)磁珠載量判斷使用量，1ml 內(nèi)毒素去除磁珠可去除 20000-25000EU 內(nèi)毒素，根據(jù)樣品中內(nèi)毒素的含量計(jì)算出使用磁珠的體積，比如 1ml 的樣本中含有 2000EU 的內(nèi)毒素，而 1ml 磁珠可去除 20000EU 內(nèi)毒素，計(jì)算得出加入 100μl 磁珠即可達(dá)到去除內(nèi)毒素的目的；其次需要根據(jù)樣本體積來(lái)決定最終的磁珠使用量，為了保證磁珠和樣品中的內(nèi)毒素充分接觸，磁珠的使用體積不能低于樣本體積的 10%, 比如 20ml 樣本中含有 20000EU 內(nèi)毒素，根據(jù)載量判定 1ml 磁珠已經(jīng)夠用，但由于樣本體積為 20ml，需要加入2ml 的磁珠進(jìn)行內(nèi)毒素去除。
3.2 清洗磁珠磁珠使用前上下顛倒混勻，用無(wú)熱源槍頭吸取對(duì)應(yīng)體積的內(nèi)毒素去除磁珠于無(wú)熱源的離心管中（請(qǐng)?jiān)跓o(wú)菌環(huán)境下如超凈臺(tái)或者生物安全柜中取用）并放置在磁力架上。待磁珠全部吸附至管壁后去除保護(hù)液，加入3倍體積的ENDOCLING®Wash Buffer重懸磁珠，輕輕顛倒混勻3-5次，再將懸液置于磁力架上，同樣待磁珠完全吸附在離心管壁后吸棄上清，重復(fù) 3-5 次。
3.3 內(nèi)毒素去除加入少量體積的樣本重懸內(nèi)毒素去除磁珠，再將重懸后的磁珠全部加入樣品中，4℃或者常溫?fù)u晃孵育 60min，最后將樣品和內(nèi)毒素去除磁珠的混合物放置于磁力架上，待磁珠完全吸附在離心管壁后吸出樣品進(jìn)行后續(xù)檢測(cè)。